生物化學與分子生物實驗學（簡體書）

《生物化學與分子生物實驗學》將生物化學與分子生物學實驗理論與技術融為一體，力求全面系統、深入淺出、注重實用，技術原理的敘述避免與理論課的重複，對於每一種生物大分子都從定量到定性進行實驗講解和操作，在綜合篇中進行綜合設計性實驗思維的培養和實驗操作，提高學生對理論和實驗的掌握能力。同時補充部分最新實驗技術，以增加學生對前沿知識領域的瞭解和掌握。並按實驗不同層面類別分列於4篇中，從基本實驗操作到綜合設計性實驗延伸，可供不同條件的學校選做。．

《全國高等院校醫學實驗教學改革教材:生物化學與分子生物實驗學》具有完整系統的知識體系，實驗理論詳盡充分，可以應用為獨立設置實驗課程的實驗教材。《全國高等院校醫學實驗教學改革教材:生物化學與分子生物實驗學》適合作為本科生或碩士研究生實驗技術課的教材使用，也可供有關科技人員參考。

前言
第一篇基本原理與實驗
第一章常用基本儀器的使用
第一節分光光度計的使用
第二節離心機的使用
第三節電泳儀的使用
第四節PCR儀的使用
第二章基本實驗技術
第一節層析技術
第二節分光光度技術
第三節離心技術
第四節透析超濾沉澱法
第三章糖分子
第一節糖的分子結構
第二節糖分子的理化性質
第三節實驗內容
第四章脂分子
第一節血脂的組成和理化特性
第二節脂類的氧化分解
第三節實驗內容
第五章酶分子
第一節酶的分子結構
第二節酶的理化性質
第三節影響酶活性的因素
第四節實驗內容
第六章氨基酸分子
第一節氨基酸的分子結構
第二節氨基酸的理化性質
第三節實驗內容
第七章蛋白質化學
第一節蛋白質物理化學性質
第二節蛋白質的分離純化
第三節實驗內容
第八章核酸分子
第一節核酸的性質
第二節PCR技術
第三節DNA重組
第四節實驗內容
第二篇綜合性、探索性實驗
第九章探索性實驗設計
第一節實驗設計的選題
第二節醫學分子實驗設計的原理與方法
第三節數據的記錄與處理
第四節設計性實驗的指導與考核
第五節實驗報告和論文的撰寫
第六節實驗內容
第十章生物芯片實驗
第一節生物芯片實驗原理
第二節生物芯片實驗方法
第十一章蛋白質組學實驗
第一節蛋白組學研究策略和內容
第二節蛋白質組學研究技術
第三節蛋白質組實驗準備
第四節蛋白質組實驗操作
第五節數據庫搜索（Databasessearch）
第六節蛋白質組實驗數據庫及實驗試劑配製
第三篇實驗數據庫的使用及實驗室管理
第十二章生物醫學文獻數據庫
第一節中文文獻數據庫
第二節外文文獻數據庫
第三節部分常用專業網站
附錄一實驗室日常管理規定
附錄二常用緩衝液的配製
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4.超濾裝置 超濾裝置一般由若干超濾組件構成。通常可分為板框式、管式、螺旋卷式和中空纖維式四種主要類型。由于超濾法處理的液體多數是含有水溶性生物大分子、有機膠體、多糖及微生物等。這些物質極易黏附和沉積于膜表面上，造成嚴重的濃差極化和堵塞，這是超濾法最關鍵的問題，要克服濃差極化，通常可加大液體流量，加強湍流和攪拌。
5.超濾技術的應用 在生物制品中應用超濾法有很高的經濟效益，例如，供靜脈注射的25％人胎盤血白蛋白（即胎白）通常是用硫酸銨鹽析法、透析脫鹽、真空濃縮等工藝制備的，該工藝流程硫酸銨耗量大，能源消耗多，操詐時間長，透析過程易產生污染。改用超濾工藝后，平均回收率可達97.18％；吸附損失為1.69％；透過損失為1.23％；截留率為98.77％。大幅度提高了白蛋白的產量和質量，每年可節省硫酸銨6.2噸，自來水16 000噸。
超濾技術的應用有很好的前景，應引起足夠的重視。
三、沉淀技術
沉淀是溶液中的溶質由液相變成固相析出的過程。此方法的基本原理是根據不同物質在溶劑中的溶解度不同而達到分離的目的，不同溶解度的產生是由于溶質分子之間及溶質與溶劑分子之間親和力的差異而引起的，溶解度的大小與溶質和溶劑的化學性質及結構有關，溶劑組分的改變或加入某些沉淀劑以及改變溶液的pH、離子強度和極性都會使溶質的溶解度產生明顯的改變。
在生物大分子制備中最常用的幾種沉淀方法是：中性鹽沉淀（鹽析法），多用于各種蛋白質和酶的分離純化；有機溶劑沉淀，多用于蛋白質和酶、多糖、核酸以及生物小分子的分離純化；選擇性沉淀（熱變性沉淀和酸堿變性沉淀），多用于除去某些不耐熱的和在一定pH下易變性的雜蛋白；等電點沉淀，用于氨基酸、蛋白質及其他兩性物質的沉淀，但此法單獨應用較少，多與其他方法結合使用；有機聚合物沉淀，是發展較快的一種新方法，主要使用PEG聚乙二醇（polyethyene glycol）作為沉淀劑。
1.中性鹽沉淀（鹽析法） 在溶液中加人中性鹽使生物大分子沉淀析出的過程稱為“鹽析”。除了蛋白質和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用鹽析法進行沉淀分離，20％～40％飽和度的硫酸銨可以使許多病毒沉淀，43％飽和度的硫酸銨可以使DNA和rRNA沉淀，而tRNA保留在上清。鹽析法應用最廣的還是在蛋白質領域，已有80多年的歷史，其突出的優點是：①成本低，不需要特別昂貴的設備；②操作簡單、安全；③對許多生物活性物質具有穩定作用。
（1）基本原理：蛋白質和酶均易溶于水，因為該分子的—COOH、—NH2和—OH都是親水基團，這些基團與極性水分子相互作用形成水化層，包圍于蛋白質分子周圍形成1～100nm顆粒的親水膠體，削弱了蛋白質分子之間的作用力，蛋白質分子表面極性基團越多，水化層越厚，蛋白質分子與溶劑分子之間的親和力越大，因而溶解度也越大。親水膠體在水中的穩定因素有兩個：電荷和水膜。因為中性鹽的親水性大于蛋白質和酶分子的親水性，所以加入大量中性鹽后，奪走了水分子，破壞了水膜，暴露出疏水區域，同時又中和了電荷，破壞了親水膠體，蛋白質分子即形成沉淀。
（2）鹽析的操作方法：最常用的是固體硫酸銨加入法。欲從較大體積的粗提取液中沉淀蛋白質時，往往使用固體硫酸銨，加入之前要先將其研成細粉不能有塊，要在攪拌下緩慢均勻少量多次地加入，尤其到接近計劃飽和度時，加鹽的速度更要慢一些，盡量避免局部硫酸銨濃度過大而造成不應有的蛋白質沉淀。鹽析后要在冰浴中放置一段時間，待沉淀完全后再離心與過濾。在低濃度硫酸銨中鹽析可采用離心分離，高濃度硫酸銨常用過濾方法，因為高濃度硫酸銨密度太大，要使蛋白質完全沉降下來需要較高的離心速度和較長的離心時間。